همسانه سازی آنتی ژن vpx جهت امکان بیان موقت آن در گیاه توتون

بیماری ویروسی بورس عفونی (ibdv)، یک بیماری بسیار مسری حاد و سرکوب کننده ی سیستم ایمنی در جوجه های جوان است که منجر به خسارت اقتصادی در صنعت مرغداری می شود. vpx پیش ساز پروتئین vp2 ایمنوژن اصلی محافظت کننده میزبان در مقابل بیماری ویروسی بورس عفونی است. گیاهان سیستم های بیانی مناسبی به منظور تولید اقتصادی پروتئین های نوترکیب هستند. سیستم بیان موقت در گیاه ابزاری قدرتمند به منظور بررسی خصوصیات عملکردی ژن ها و تولید پروتئین است. در این پژوهش آغازگرهای مناسب بر اساس توالی های افزایش‎دهنده ی بیان گیاهی، توالی های دو طرف ژن vpx، محل های برش مناسب، توالی his tag جهت شناسایی و تخلیص پروتئین طراحی شد. ژن مورد نظر در ناقل بیانی گیاهی pcambia1305.1 تحت کنترل پیش برنده camv35s و خاتمه دهنده nos همسانه سازی شد. این سازه با استفاده از روش شوک حرارتی به باکتریescherichia coli سویه ی dh5? انتقال داده شد؛ و با استفاده از چندین تکنیک از قبیل colony pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی حضور ژن vpx اثبات شد. سرانجام این سازه به اگروباکتریوم تومفیشنس سویه ی lba4404 با استفاده از روش ذوب و یخ انتقال داده شد. به منظور انتقال ژن به گیاه توتون از وکیوم اگرواینفیلتریشن استفاده شد. سپس کل پروتئین ها از برگ ها استخراج شد و حضور پروتئین vpx با استفاده از آنالیز دات بلات شناسایی گردید. در این بررسی نشان داده شد که بیان پروتئین در برگ های زخمی نسبت به برگ های سالم گیاه کامل بالاتر است. همچنین نتایج نشان داد که میزان بیان در روز ششم بعد از وکیوم اینفیلتریشن نسبت به روزهای چهارم و پنجم بعد از انتقال بالاتر بوده و از روز هفتم روند کاهشی مشاهده گردید. .